Kako postati komuna Schizophyllum: Stvorite sterilnu kulturu od pronađenih gljiva: 3 koraka (sa slikama)

2024 Autor: John Day | [email protected]. Zadnja promjena: 2024-01-30 09:37

Ovo uputstvo usredotočeno je na objašnjavanje kako stvoriti sterilnu kulturu komune gljiva Schizophyllum (uobičajeni naziv gljiva Split Gill) na Petrijevoj zdjelici koristeći pronađene gljive. Utvrđeno je da komuna Schizophyllum ima više od 28 000 spolova, može se naći na svim kontinentima osim na Antarktiku i ima sposobnost (poput drugih "gljivica bijele i smeđe truleži") razgraditi onečišćenje endokrinog sustava (plastika, oponašanje hormona u industrijskim petrokemijskim tvarima, poput gnojivo Atrazin, plastifikator Bisfenol-A ili sintetski hormon Dietilstilbestrol).

Preći ću na tehnike identifikacije divljih gljiva, kako napraviti petrijevu zdjelicu s hranjivim agarima i kako koristiti pronađene gljive za uzgoj sterilne izolirane kulture u vašoj petrijevoj zdjelici. Ostali instruktivi u ovoj seriji prelaze tehnike poput genetske identifikacije gljiva, jednostavnih enzimskih testova za provjeru sposobnosti gljive da razbije plastiku i hormone oponašajući zagađenje te kako napraviti sir sa S. Commune.

Ovaj projekt proizašao je iz zajedničkog rada Mary Maggic, Paula Pin i mene tijekom boravka u HANGAR -u u Barceloni, Španjolska u jesen rujna 2018. Za više informacija o projektu pročitajte na ~~ ili preskočite sve Bla Bla i idite ravno na Step 1 za vodič:)

Slike su iz Fanzine časopisa Schizophyllum Commune ~ datoteke se mogu besplatno preuzeti ovdje

Tijekom boravka tri su nam glavna cilja bila:

1 ~ Istražite i sažmite znanstvenu literaturu o komuni Schizophyllum i njezinim različitim interakcijama s hormonima i endokrinim ometajućim petrokemijskim zagađivačima. S. Commune jedna je od mnogih gljivica "bijele i smeđe truleži" sa sposobnošću razgraditi hormonsko i endokrino ometajuće zagađenje. Ove se gljive hrane stablima izlučujući "lignocelulozne" enzime iz svojih umreženih tijela ili "micelija", a enzimi mogu razgraditi celulozu i lignin od kojeg se drveće sastoji. Zbog strukturnih sličnosti između celuloze, lignina i hormona EDS -a poput atrazina, BPA, estradiola, dietilstilbestrola i nenilfenola, "lignocelulozni" enzimi koje gljive izlučuju također mogu razgraditi veliki broj toksičnih tvari. Osim toga, S. Commune proizvodi imunostimulirajuće polisaharide koji su korisni kao prevencija i liječenje raka (odobreno u Japanu za liječenje raka vrata maternice), mogu poboljšati fitoestrogena svojstva određenih biljaka fermentacijom, mogu se koristiti umjesto sirila i laktobacilija u procesima proizvodnje sira i proizvode enzime za otapanje trombinskog ugruška (korisno u liječenju tromboze). Čudno, te iste "beta-glukane" koji se mogu ekstrahirati kipućom vodom kao lijekovi protiv raka i imunostimulansi, također koristi naftna industrija za povećanje prinosa nafte, vezujući S. Commune u bizaarsku povratnu spregu s proizvodnjom endokrinih poremećaja petrokemikalije može razgraditi i sanirati.

2 ~ Razviti DIY i DIWO (učini to s drugima) protokole koji pojednostavljuju ove recepte za rad s ODG -ovima i gljivama za prevođenje kodificiranog znanstvenog znanja na jezik koji je pristupačniji. Iskoristite ove recepte za obrazovanje, ispitivanje, otpor prema molekularnim kolonizacijama i stvaranje novih narativa o nastajanju više vrsta i našoj kolektivnoj mutagenezi.

3 ~ Izazovite dominantni cisheteronormativni, queerphobic diskurs koji okružuje endokrine kemikalije koje ometaju (EDC). Citirajući stipendije Malin Ah-King i Eve Hayward o ovim pitanjima: "Mnoge novine izvještavaju o ovim zastrašujućim endokrinim pričama iz naših dvorišta. U nastojanju da se ova pitanja istaknu-kao što ćemo opisati u nastavku-mediji su osvijetlili Frankensteinovu metamorfozu koja prijeti seksu i seksualnosti. Umjesto rješavanja mnogih drugih zdravstvenih rizika povezanih s izlaganjem otrovima, najsenzacionalnija i polemička pitanja predstavljaju raspravu i kritički odgovor. Postavlja se pitanje: Zašto je seks važniji od raka, autoimune bolesti, pa čak i smrt? Koji se kulturni živci (od kojih su mnogi globalizirani) pokreću? I, za nas koji imamo feminističke brige, kako preusmjeriti raspravu dalje od esencijalizma, seksizma i heteronormativnosti? " (Otrovni spolovi).

Komuna Schizophyllum jedinstvena je gljiva bijele truleži po tome što je utvrđeno da ima preko 28 000 genetskih spolova. Ova adaptacija, mnogi teoretiziraju, omogućila je nevjerojatnu genetsku raznolikost ove vrste koja postoji na svim kontinentima u svijetu osim na Antarktiku. Željeli smo slaviti prekrasnu spolnu višestrukost ovog organizma kao jedan primjer čudesnosti biologije. Dominantni diskurs koji okružuje ODG-ove u medijima, pa čak i od aktivista za zaštitu okoliša, snažno se usredotočuje na neznanstvene narative, da te molekule uzrokuju određene seksualnosti ili rodove koje naše društvo patologizira, označava ne-normativnim i često nastoji ukloniti ili izbjeći. Ne samo da je spolno paničan, queer fobičan fokus negodovanja javnosti zbog znanstveno nerealnog EDC-a (hormoni i endokrini poremećaji ne čine ljude čudnima ili transima), već zanemaruje sve razorno stvarne učinke koje možemo povezati s EDC-om: pretilost, poremećaji štitnjače, određeni karcinomi, među ostalim zdravstvenim rizicima.

Korak 1: Pronađite komunu shizophyllum koja živi u vašoj zajednici

Sterilne kulture laboratorija razreda Schizophyllum Commune mogu se kupiti za oko 350 USD u mikrobiološkoj banci za kulturu, poput ATCC … zbog čega smo se besplatno odlučili za uzgoj iz divljih gljiva:)

Bilo mi je lako jer sam čitala o komuni Schizophyllum i slučajno sam primijetila kako jednog dana raste na drvetu ispred mog stana. Ako nemate tu sreću da ste slučajno naišli na S. Commune u svom susjedstvu, poželjet ćete otići u šumovito područje u potragu za gljivama "bracket" koje rastu na bolesnom drveću tvrdog drveta (drveće koje izgleda kao da ne radi previše dobro) ili oboreno drveće. S. Commune jedna je od najčešćih postojećih gljiva diljem svijeta i može se naći u osnovi bilo gdje na tvrdom drvu za uzgoj.

Mushroomobserver.org pruža izvrstan detaljan opis gdje i kada ćete vjerojatno pronaći S. Commune, kao i kako ga identificirati i kako izbjeći "sličnost" koja bi mogla dovesti do pogrešne identifikacije:

"IDENTIFIKACIJA: Općinu Schizophyllum lako je prepoznati po rascijepljenim škrgama, gustoj dlaci i kapici u obliku lepeze. Kapa je široka 1-4,5 cm i obično ima školjku ili oblik lepeze sa sivom do bjelkastom površinom. Bazidiospore su 5-7,5 × 2 -3 mikrometra. Slična gljiva poznata kao "Crimped Gill" Plicaturopsis crispa nije toliko rasprostranjena.

STANIŠTE: Općina Schizophyllum raste na tvrdom drvetu koristeći enzime za razgradnju lignina i uzrokuje "bijelu trulež". Tako se nalazi u većini drvenih područja. Može se pronaći tijekom cijele godine zbog svoje sposobnosti da se osuši, rehidrira u boljim uvjetima, a zatim nastavi s sporulacijom.

Ova gljiva može parazitirati na stablima malog promjera koja su pod stresom drugih čimbenika, poput suše.

IZGLEDAJTE SLIČNO: Plicaturopsis crispa ili "Crimped Gill" sličan je splitskom škrgu. Također ima plodište u obliku ljuske/lepeze. Međutim, kapa je crvenkastosmeđa ili žutosmeđa, a donja strana je vrlo prepoznatljiva. Ima zgnječene vene poput škrga koje se znatno razlikuju od rascjepljenih škrga u općini Schizophyllum. Crimped Gill je rjeđi, ali prepoznatljiv kada se pronađe."

Korak 2: Napravite hranjive agarske ploče za S. Commune da rastu

Kako biste izolirali kulturu S. Commune koju nađete, trebat će vam neke Petrijeve zdjele napunjene hranom za gljive. Ekstrakt slada Agar je jednostavna hrana za S. Commune ili "hranjivi medij" koji se može napraviti od lako dostupnih sastojaka. Također je dobar izvor hrane za korištenje u eksperimentima enzimskog testa sa S. Commune i drugim gljivama bijele ili smeđe truleži ~~ ovaj proces će biti opisan u drugom uputstvu.

NUSPOMENA: Ako ste imali problema s pronalaskom S. Commune, u istoj obitelji ima mnogo drugih gljiva koje se mogu uzgajati istim postupcima i jednako su dobre, ako ne i bolje, u razgradnji onečišćujućih tvari koje oštećuju endokrini sustav. Ćureći rep (Trametes Versicolor) pronađen je u mnogim studijama koje su gledale na stotine gljiva bijele i smeđe truleži kao najveće proizvođače "lignoceluloznih" enzima koji razgrađuju petrokemijsko zagađenje. Bukovače su također vrlo dobre u tome.

Svoj mikrobiološki rad obavljam u biološkom laboratoriju zajednice pod nazivom BUGSS (Baltimore Underground Science Space) gdje imam pristup staklenom posuđu, digitalnim vagama, stupnjevastim cilindrima, autoklavu (za toplinsku i tlačnu sterilizaciju medija) itd. Ovakvi laboratoriji nastao diljem svijeta u posljednjem desetljeću, pa biste mogli htjeti provjeriti ovaj popis da biste vidjeli postoji li u vašoj blizini. Ako u vašem području nemate sjajan laboratorij zajednice poput ovog, morat ćete uložiti u neku osnovnu opremu za ovaj proces, kao što su:

1 ~ Digitalna vaga za precizno mjerenje sastojaka

2 ~ Lonac pod pritiskom za sterilizaciju medija toplinom i parom

3 ~ Petrijeve posude, koje se mogu kupiti na Internetu prilično jeftino, staklo za višekratnu upotrebu ili plastika za jednokratnu upotrebu će raditi, ali ponovno je uvijek bolje:)

4 ~ Stakleno posuđe za miješanje sastojaka, sterilizaciju i skladištenje.

Ako ne želite ulagati u tu opremu, možete pronaći unaprijed izlivene agar ploče s ekstraktom slada za kupnju na web stranicama poput Amazona ~ dugoročno će biti samo skuplje ako planirate nastaviti raditi na mikrobiologiji.

Već postoji mnogo sjajnih vodiča i video zapisa na YouTubeu o tome kako sami napraviti petrijeve posude s hranjivim medijima. Pa umjesto da ulazim u detalje o ovome, povezat ću se samo s par - i dati recept za 2% sladni ekstrakt slada, koji je hranjivi medij koji ćete koristiti.

Svježe gljive: Vodič o tome kako napraviti ploče od agara za uzgoj gljiva kod kuće

Mykoweb: Početak uzgoja gljiva

List s tehničkim podacima o ekstraktu slada

2% ekstrakt slada (MEA) ~~ Recept za 1 litru:

20 g ekstrakta slada (uobičajena zaliha za proizvodnju piva, može se kupiti na mreži)

15 g agara (sredstvo za učvršćivanje - koristi se za kuhanje često pa se može kupiti na mreži ili u nekim trgovinama)

1 litra H20 (obično koristim vodu s reverznom osmozom koja se može kupiti u većini trgovina u galonima)

Ovaj se recept može lako izmijeniti ako želite napraviti manje količine. Na primjer, često pravim samo 250 ml odjednom, pa na kraju koristim samo 5 grama ekstrakta slada, 3,75 grama agara i 250 ml vode.

Korak 3: Nacijepite svoje Petrijevo jelo gljivama

Gljiva koju vidite naziva se "plodište", to je samo mali dio organizma. Većina njegova tijela skrivena je u drvetu (ili u zemlji), konzumirajući drvo. Ovaj dio gljive naziva se micelij. Za uzgoj bijelog vlaknastog, tentakularnog, rizomatskog, rizomatskog, micelijskog tijela Schizophyllum Commune na Petrijevoj zdjelici, uzet ćete uzorak stabljike, sterilizirati i staviti na svoje MEA ploče. Micelij će izrasti iz sterilisanog uzorka jezgre stabljike gljive i kolonizirat će Petrijevu zdjelicu, izgledajući kao bijela pamučna prostirka.

Trebat će vam:

• Ploče od agregata za ekstrakt slada (MEA) koje ste pripremili u prethodnom koraku
• 70% izopropil alkohola (alkohol za trljanje) i bočica s raspršivačem
• Papirnati ručnici
• Skalpel ili samo rezač brijača od nehrđajućeg čelika će raditi
• metalne pincete
• rukavice
• Plamen - koristim alkoholnu svjetiljku za sterilizaciju instrumenata, NonDisjunction ima odličan vodič o tome kako je napraviti ovdje.
• Sterilna površina za rezanje (upravo sam za to koristila sterilnu petrijevu zdjelu)
• Parafilm, parafinski film koji se koristi za brtvljenje Petrijevih zdjelica - možete koristiti i samoljepljivu traku ako nemate ovu

STERILNA TEHNIKA:

Glavna stvar koju želite imati na umu kada pokušavate koristiti sterilnu tehniku je da bakterije i spore neprestano padaju u zrak, pa želite držati svoje Petrijeve zdjele što je moguće više pokrivenim. Kad podignete poklopce za ulijevanje medija ili cijepite, uvijek je najbolje držati poklopac neposredno iznad posude, omogućujući vam horizontalni pristup iznutra, ali držeći poklopac iznad posude kako biste spriječili upadanje bakterija. Drugo, su divovski konglomerat ljudskih, bakterijskih, gljivičnih i drugih organizama ~~ iako to ne možete vidjeti, okruženi ste gustim oblakom mikroba koji se difundiraju iz vašeg tijela. Umjesto da samo sjedite na površini kože, vaš mikrobiom se pruža u zrak ~~ takooooooo, nemojte nikada mahati rukama nad petrijevom zdjelicom niti se naginjati nad otvorenu zdjelu da pogledate. I nosite rukavice ako imas ih;)

POSTAVITE POLUSTERILNI RADNI PROSTOR

Odaberite neporoznu radnu površinu bez ostataka i smeća. Poprskajte područje 70% -tnom otopinom izopropilnog alkohola i obrišite ga papirnatim ubrusom. Postavite svoj plamen u središte svog radnog područja i zapalite ga. Morat ćete raditi što je moguće bliže plamenu jer stvara malo sterilno polje oko njega. Postavite MEA ploče s jedne strane, a uzorak gljiva na sterilnu površinu za rezanje s druge strane. Obično koristim sterilnu petrijevu zdjelicu kao svoju sterilnu površinu za rezanje, kao i oslonac za alat. Ulijte malo izopropilnog alkohola u malu čašu - to ćete koristiti za sterilizaciju oštrice i pincete tijekom rada.

*¡~ INOCULATE ~!*

Prije nego učinite bilo što, sterilizirajte oštricu i pincetu tako što ćete ih umočiti u izopropilnu alku, a zatim ih malo držati iznad plamena. Nakon sterilizacije odložite ih na sterilnu površinu za rezanje ako ih odložite. Pincetom držite stabljiku gljive mirno i odrežite joj komad. Uzmite ovaj komad i izrežite sve strane tako da na kraju dobijete malu kocku jezgre stabljike gljiva sa uklonjenim svim vanjskim površinama. To pomaže u uklanjanju svih ostalih mikroba koji žive na gljivama kako ne bi kontaminirali vašu kulturu. Zatim umočite jezgru stabljike u izopropil na oko 30 sekundi, izvucite je i pustite da se osuši unutar sterilnog polja plamena (nemojte koristiti plamen za sušenje jer će to gljivicu ubiti). Ponovno sterilizirajte pincetu plamenom dok čekate da se jezgra stabljike osuši. Zatim jednostavno podignite poklopac jedne od vaših MEA ploča tek toliko da pinceta uđe sa strane, a sterilisanom pincetom postavite jezgru stabljike u središte ploče. Zatvorite ploču parafilmom i tijekom sljedećih nekoliko tjedana trebali biste vidjeti S. Commune micelij koji kolonizira ploču.

Obično napravim nekoliko ploča tijekom rada s divljim uzorcima, tako da ako dobijem kontaminaciju, veća je vjerojatnost da ću imati barem jednu čistu kulturu.